微生物菌種管理的相關流程

2021-06-14 05:34:33 字數 2182 閱讀 6796

1.1菌株的採集

實驗室用菌種一是到國家法定機構採購,二是購買商業派生菌種,三是科研中菌種交流。不管是哪種**,均統一採集。採集中嚴格按照規範執行。要求包裝可靠,採集迅速,不洩漏不汙染。保證菌種合格和環境安全。採集中要有菌種傳代標識。選擇有資質的標準菌株的合格**商,每批標準菌株必須附帶有**商的合格證或檢測報告或說明書,來證明所採購的標準菌株是合格的。

1.2標準菌株和驗收

實驗室收到標準菌株,首先應進行符合**官檢查,記錄菌株號和標準菌株**途徑資訊,確保溯源性清楚。同時還應記錄標準菌株名稱和數量、生產日期、接收日期和有無破損等情況。

1.3凍幹標準菌株的復活

1.3.1開啟產品包裝:先用70%酒精棉擦拭外包裝,再開啟使用。

1.3.2復活:選擇合適的培養基和培養條件(根據菌種使用說明書,見附錄)進行復活。菌種的首次活化最好是在非選擇性瓊脂培養基上,除非特殊情況或特別推薦,一般不用液體培養基。凍幹菌株的傳代次數不得超過5代,從標準菌株保藏中心購買的凍幹標準菌株為第f0代。

注:培養基後面的數字編號為廣東環凱微生物****的產品編號,如需採購,請聯絡經銷商或業務員。上表提供了菌種傳代短期儲存的方法,供參考。

1.4工作菌株確認方法及依據

用無菌接種環取上述培養物,在相應的培養基平板(營養瓊脂、大豆胰蛋白腖瓊脂)上或相應的細菌鑑別平板(如伊紅美藍、麥康凱、bp等上劃線分離單個菌落,置適宜條件下培養(若該類微生物為厭氧菌,則培養條件應為厭氧條件)。以同樣方法取真菌和酵母菌至sda(薩布羅培養基)平板上或玫瑰紅鈉培養基平板上,23~28℃下培養7d;培養後觀察是否具有典型的菌落狀態,然後挑取單一純菌落,進行革蘭染色、鏡檢,觀察其染色特徵及菌體形態以確定菌種。

1.5 汙染處理

假如在該平板上發現有其他菌落生長,則說明操作有汙染或菌種不純。要將

該汙染培養物做滅菌處理,尋找原因,重新分離挑選純菌落。

1.6菌種儲存

所有菌種均由實驗室專人(雙人雙鎖)儲存於專用冰箱或其它儲存方式。要建立菌種登記臺帳,詳細記錄菌種採集、保管、製備、使用、處置情況;每一種菌種一定要有檢測鑑定報告(具體的的鑑定方法見菌種質量報告鑑定證書上的方法);

具體菌種儲存方法一般為:

將復甦後肉湯與滅菌甘油按15%甘油比例(肉湯8.5ml+甘油1.5ml)混合,-30 ℃凍存,(可用2ml凍存管凍存多管),作為保藏儲備菌株f1代,也可使用商品化的菌種儲存管。

1.7菌種的傳代

1.7.1標準菌株的復甦:

① 菌種操作應在無菌條件下進行,防止雜菌汙染。

② 每次使用和復甦時只需將小珠在平板上滾動或置肉湯中培養。

1.7.2標準儲備菌株每轉接一次須進行確認。(確認方法一般為他們各自獨有的形態,在鑑別培養基上的形態)

1.7.3工作菌株轉接的方法:

①、配製營養瓊脂培養基(溶血性弧菌加3%氯化鈉 ),121℃高壓滅菌15分鐘後分裝在試管內,冷卻後備用。

②、在無菌條件下,用接種環挑取菌苔至新鮮試管上作“米”字形劃線接種,放置在36℃的培養箱內培養24小時。

1.7.4工作菌株的使用

1.7.4.1內部質量控制:一個月一次陽性對照、培養基每批驗收;

1.7.4.2外部質量控制:能力驗證、實驗室比對;

1.7.5工作菌株的期間核查

1.7.5.1期間核查的頻率:每半年對使用標準菌株進行一次期間核查。

1.7.5.2工作菌株期間核查的方法及依據:同工作菌株的確認一樣。

1.7.5.3建立標準菌株期間核查記錄。

1.8菌種的標識和使用期限:

1.8.1標識:菌種代數的計算為乾粉菌種為第0代,轉接一次加一代。具體標識為:例單增李斯特氏菌第0代,標識為dz-0,第一代標識為dz-01第一代有12支,則dz-01-01、……、dz-01-12;並標明日期:如2016.02.13這樣填寫。

1.9 菌種的保藏

1.9.1將試管內菌種放入冰箱中2~8℃冷藏儲存。

1.9.2將傳代並經過培養後的菌種放入冰箱中2~8℃儲存。每支儲存菌種需標明菌名、標準編號、傳次、傳代日期。

1.10菌種的銷燬

1.10.1菌種使用後或超過貯存期的應進行銷燬。

1.10.2需銷燬的菌種,應用高壓蒸汽(121℃)滅菌30分鐘。

1.10.3滅菌後,再進行清洗和處理。

1.10.4銷燬的菌種應做好記錄。銷燬時由化驗負責人監督銷燬,保管人員負責銷燬。

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